Plásmido CRISPR de Activación (h) LNX3: sc-403866-ACT

PDZRN3 codifica LNX3, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING y con múltiples dominios PDZ que coordina interacciones proteína–proteína y el recambio dependiente de ubiquitina de componentes de señalización. A través del ensamblaje de complejos mediado por andamiajes (scaffolds) y la ubiquitinación, LNX3 participa en la regulación del tráfico de receptores y de programas transcripcionales aguas abajo que moldean la polaridad celular, la diferenciación y la remodelación tisular. Las conexiones descritas con vías que gobiernan la señalización de factores de crecimiento y Wnt/polaridad planar celular destacan funciones en el patrón de desarrollo y la organización del citoesqueleto. La expresión desregulada de PDZRN3/LNX3 se ha asociado con cambios en estados proliferativos y de diferenciación en múltiples contextos relevantes para enfermedad, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios centrados en vías.

LNX3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PDZRN3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LNX3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PDZRN3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PDZRN3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LNX3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PDZRN3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LNX3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LNX3 en células tumorales con expresión de PDZRN3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.