Limd1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424343

Panoramica

LIM domain containing 1 (Limd1) è una proteina di tipo “scaffold” che si localizza nelle adesioni focali e nelle giunzioni cellula–cellula, coordinando interazioni proteina–proteina che modellano l’organizzazione del citoscheletro e la meccanotrasduzione. Limd1 partecipa a vie di segnalazione che regolano adesione cellulare, migrazione e controllo della crescita, ed è stata collegata alla regolazione della segnalazione Hippo/YAP attraverso interazioni che influenzano l’attività di LATS e la localizzazione di YAP/TAZ. Nei sistemi murini, Limd1 è utile per studiare l’omeostasi tissutale e i programmi di sviluppo in cui la segnalazione dipendente dall’adesione è cruciale. La deregolazione delle reti associate a LIMD1 è rilevante nella biologia dei geni oncosoppressori e nei fenotipi associati alla metastasi, inclusi alterazioni dell’invasione e processi simili alla transizione epitelio–mesenchimale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Limd1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Limd1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Limd1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Limd1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Limd1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Limd1 per lo studio della segnalazione di Limd1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Limd1 critici per la funzione di Limd1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Limd1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Limd1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Limd1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Limd1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Limd1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Limd1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Limd1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Limd1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.