Latrophilin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430273-ACT

Adgrl2 codifica a latrofilina-2, um receptor acoplado à proteína G de adesão (aGPCR) que contribui para a comunicação célula–célula ao acoplar sinais de adesão extracelulares à sinalização intracelular. A latrofilina-2 participa de processos ligados à conectividade neuronal, à organização de sinapses e ao padrão de desenvolvimento por meio de sinalização associada a GPCR e remodelamento do citoesqueleto. Ao interagir com ligantes extracelulares e módulos de adesão, ela pode influenciar vias que regulam a migração celular, a polaridade e a arquitetura tecidual. Alterações na sinalização de aGPCRs e em programas de adesão são frequentemente estudadas no contexto de fenótipos do neurodesenvolvimento e de interações celulares desreguladas relevantes para a função de circuitos associada a doenças.

Latrophilin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Adgrl2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Latrophilin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Adgrl2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Adgrl2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Latrophilin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Adgrl2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Latrophilin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Latrophilin-2 em células tumorais com expressão de Adgrl2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.