LAMP-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421383-LAC

Lamp2 codifica la glicoproteina di membrana associata ai lisosomi 2 (LAMP-2), un componente principale della membrana limitante lisosomiale che sostiene l’integrità del lisosoma e il traffico di membrana. LAMP-2 è centrale nelle vie autofagia–lisosoma, inclusa l’autofagia mediata da chaperone e la fusione tra autofagosoma e lisosoma, influenzando così il controllo qualità delle proteine, il turnover degli organelli e le risposte cellulari allo stress. Un’alterata attività di LAMP-2 compromette la funzione lisosomiale e il flusso autofagico, processi implicati nell’omeostasi dei cardiomiociti, nel mantenimento del muscolo scheletrico e nei meccanismi neurodegenerativi. Nei modelli murini, Lamp2 è ampiamente utilizzato per studiare la biologia dei lisosomi, l’immunometabolismo e le conseguenze cellulari di una clearance difettosa delle macromolecole.

Le particelle di attivazione lentivirale LAMP-2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Lamp2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale LAMP-2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Lamp2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di LAMP-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Lamp2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.