Laminin α-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401162-ACT

LAMA2 codifica la laminina α-2, una subunità glicoproteica chiave della matrice extracellulare della laminina-211/221, che sostiene l’architettura della membrana basale e l’adesione cellula–matrice. Attraverso interazioni con integrine, distroglicano e altri componenti della matrice, la laminina α-2 regola l’organizzazione del citoscheletro, la migrazione e la segnalazione di sopravvivenza in muscolo e nervo periferico, influenzando vie come focal adhesion, PI3K/AKT e MAPK. LAMA2 è altamente rilevante per l’integrità del muscolo scheletrico e la mielinizzazione, e alterazioni della sua espressione o funzione sono associate a fenotipi di distrofia muscolare congenita e a caratteristiche di neuropatia periferica. In ambito di ricerca, l’attività di LAMA2 viene spesso studiata in modelli di rimodellamento della matrice extracellulare, organizzazione della giunzione neuromuscolare e meccanotrasduzione.

Laminin α-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di LAMA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Laminin α-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus LAMA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione LAMA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Laminin α-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus LAMA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Laminin α-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Laminin α-2 nelle cellule tumorali con espressione di LAMA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.