Lamin B2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401873

Panoramica

LMNB2 codifica la lamina B2, una proteina essenziale del tipo V dei filamenti intermedi della lamina nucleare, che sostiene l’architettura dell’involucro nucleare e l’organizzazione della cromatina. La lamina B2 contribuisce alla replicazione del DNA, alla regolazione trascrizionale e alla riassemblaggio nucleare durante la mitosi, integrando ruoli strutturali e regolatori nella meccanica nucleare e nella stabilità del genoma. Come parte della più ampia rete delle lamine, influenza processi quali il posizionamento dei pori nucleari e l’ancoraggio dei domini associati alla lamina (LAD), che modellano lo stato epigenetico e la differenziazione cellulare. La disregolazione dei componenti della lamina nucleare, incluso LMNB2, è collegata ad alterazioni della morfologia nucleare ed è stata associata a fenotipi neuroevolutivi e proliferativi rilevanti per la meccanobiologia e la ricerca sul mantenimento del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Lamin B2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LMNB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LMNB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LMNB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Lamin B2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LMNB2 per lo studio della segnalazione di Lamin B2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LMNB2 critici per la funzione di Lamin B2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LMNB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Lamin B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Lamin B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LMNB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Lamin B2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Lamin B2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LMNB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LMNB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.