Plasmide Double Nickase (h2) L-ficolin: sc-404837-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) L-ficolin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide L-ficolin Double Nickase (h2) et le plasmide L-ficolin Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FCN2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: L-ficolin Antibody (FCN219): sc-130297
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) L-ficolin | sc-404837-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain FCN2 code la L‑ficoline, une lectine soluble de reconnaissance de motifs principalement produite par le foie, qui initie la voie des lectines du complément en se liant à des motifs glucidiques microbiens ou du soi altéré et en recrutant des protéases MASP, déclenchant ainsi l’activation de C4/C2, l’opsonisation et des signaux inflammatoires. En modulant la clairance dépendante du complément, l’agglutination et l’engagement des phagocytes, la L‑ficoline contribue à l’homéostasie de l’immunité innée à l’interface entre l’infection et l’inflammation stérile. Des variations génétiques ou une expression dérégulée de FCN2 ont été associées à une susceptibilité modifiée aux maladies infectieuses et à des phénotypes inflammatoires, ce qui soutient son utilisation comme nœud moléculaire reliant l’activité du complément, les réponses hépatiques de phase aiguë et les interactions hôte‑pathogène. Les modèles d’édition génique ou de perturbation de FCN2 permettent des études mécanistiques de l’activation du complément via la voie des lectines, de la reconnaissance dépendante des glycannes et des voies effectrices immunitaires en aval dans des systèmes cellulaires et in vitro pertinents.
L-ficolin Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FCN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FCN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FCN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FCN2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.