L-FABP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401554-ACT

FABP1 umano codifica la proteina legante gli acidi grassi di tipo epatico (L-FABP), uno chaperone lipidico citosolico che lega acidi grassi a catena lunga, acidi biliari e altri ligandi idrofobici per coordinare il traffico intracellulare e il metabolismo. L-FABP favorisce l’assorbimento degli acidi grassi, la β-ossidazione, la dinamica delle goccioline lipidiche e la segnalazione mediata dai lipidi, collegando l’equilibrio energetico degli epatociti a programmi trascrizionali regolati da PPAR e alle risposte allo stress ossidativo. Alterazioni dell’espressione e della funzione di FABP1 sono state associate a una gestione epatica dei lipidi e a una segnalazione infiammatoria deregolate nei contesti di malattia epatica metabolica, ed è spesso utilizzato come marcatore di differenziazione degli epatociti e dello stato del metabolismo lipidico. Queste caratteristiche rendono FABP1 un nodo utile per interrogare le vie che governano lipotossicità, funzione mitocondriale e metabolismo responsivo agli xenobiotici in modelli cellulari umani.

L-FABP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FABP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

L-FABP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FABP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FABP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di L-FABP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FABP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da L-FABP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via L-FABP nelle cellule tumorali con espressione di FABP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.