KLF6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400888-ACT

KLF6 (fator 6 semelhante a Krüppel) é um fator de transcrição humano do tipo “zinc finger” que regula programas gênicos que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse celular. Ele modula redes transcricionais ligadas à sinalização de TGF-β e a vias dependentes de MAPK, influenciando a expressão de alvos envolvidos na restrição do crescimento e no remodelamento da matriz extracelular. A atividade de KLF6 contribui para a manutenção da homeostase tecidual e é frequentemente implicada em estados transcricionais desregulados observados na biologia do câncer e em processos fibróticos. Como regulador dependente do contexto, KLF6 serve como um nó útil para dissecar circuitos transcricionais e relações genótipo-fenótipo em diversos modelos celulares.

KLF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KLF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KLF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KLF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KLF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KLF6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KLF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KLF6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KLF6 em células tumorais com expressão de KLF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.