Plasmide Double Nickase (h) KIF3A: sc-403463-NIC

KIF3A code la protéine « kinesin family member 3A », une sous-unité motrice essentielle du complexe kinésine-2 hétérotrimérique, qui assure le transport antérograde le long des microtubules. KIF3A est indispensable au transport intraflagellaire et à l’assemblage du cil primaire, ce qui la relie à la transduction des signaux des voies Hedgehog et Wnt, ainsi qu’à une régulation plus large de la polarité cellulaire et de la signalisation mécanoréceptrice. Par ses fonctions dans le trafic ciliaire et le déplacement de cargaisons dépendant des microtubules, KIF3A influence les programmes de développement et l’homéostasie épithéliale. Une altération de la fonction ou de l’expression de KIF3A a été associée à des phénotypes liés aux ciliopathies et a été étudiée dans la biologie des voies aériennes et dans d’autres contextes pathologiques pertinents où la signalisation ciliaire est perturbée.

KIF3A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KIF3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KIF3A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KIF3A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KIF3A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.