Keratin 6B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421355

Descripción general

Krt6b codifica la queratina 6B, una proteína de filamento intermedio tipo II que se asocia con queratinas tipo I para construir la red del citoesqueleto de los epitelios estratificados. La queratina 6B contribuye a la resistencia mecánica, la remodelación epitelial y los programas inducidos por estrés que acompañan la reparación de heridas y los estados hiperproliferativos, en coordinación con procesos de diferenciación y de organización del citoesqueleto. En la piel de ratón y anexos relacionados, la expresión de Krt6b se induce durante la lesión y la inflamación, vinculando la dinámica de los filamentos de queratina con la función de barrera y la homeostasis tisular. La desregulación de las redes de queratina se asocia con fragilidad epitelial y fenotipos de queratinización aberrante, lo que convierte a Krt6b en un punto de interés útil para estudiar respuestas al estrés dependientes de queratinas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Keratin 6B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Krt6b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Krt6b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Krt6b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Keratin 6B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Krt6b para la investigación de la señalización de Keratin 6B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Krt6b críticos para la función de Keratin 6B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Krt6b para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Keratin 6B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Keratin 6B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Krt6b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Keratin 6B (m) y el plásmido HDR Keratin 6B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Krt6b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Krt6b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.