Keratin 32 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410857

Descripción general

KRT32 codifica la queratina 32, una queratina capilar de tipo I que polimeriza con queratinas de tipo II para formar filamentos intermedios esenciales para la integridad estructural y la resistencia mecánica de las fibras capilares. Como parte del citoesqueleto de queratinas, KRT32 contribuye a la organización del citoesqueleto, a los programas de diferenciación epitelial en los linajes del folículo piloso y al ensamblaje de estructuras queratinizadas. La expresión alterada o la disrupción de las redes de queratinas del cabello se asocia con fenotipos de fragilidad del tallo piloso y ofrece un indicador manejable para estudiar la dinámica de ensamblaje de los filamentos de queratina. Por tanto, KRT32 es relevante para investigar respuestas al estrés del citoesqueleto, el recambio de filamentos de queratina y las relaciones genotipo–fenotipo en la biología del cabello y los procesos de queratinización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Keratin 32 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KRT32 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KRT32 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KRT32 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Keratin 32.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KRT32 para la investigación de la señalización de Keratin 32, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KRT32 críticos para la función de Keratin 32
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KRT32 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Keratin 32 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Keratin 32 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KRT32. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Keratin 32 (h) y el plásmido HDR Keratin 32 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KRT32 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KRT32 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.