karyopherin α2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401484-ACT

KPNA2 kodiert Karyopherin alpha 2, ein Adapterprotein der Importin-α-Familie, das klassische nukleäre Lokalisationssignale erkennt und mit Importin-β zusammenwirkt, um einen regulierten Kernimport durch den Kernporenkomplex zu vermitteln. Durch die Steuerung des nukleozytoplasmatischen Transports von Transkriptionsfaktoren, DNA-Reparaturproteinen und Zellzyklusregulatoren beeinflusst KPNA2 Genexpressionsprogramme, den mitotischen Ablauf und Stressantworten. Veränderte KPNA2-Expression und Transportdynamiken wurden mit proliferativen Phänotypen und fehlregulierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, wie sie häufig in der Krebsbiologie und in der Forschung zur Genomstabilität untersucht werden. KPNA2 wird außerdem als Marker für gestörten nukleären Transport verwendet und ermöglicht mechanistische Studien zur Proteinlokalisation und Transkriptionskontrolle.

karyopherin α2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen KPNA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

karyopherin α2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des KPNA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der KPNA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen karyopherin α2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native KPNA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von karyopherin α2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des karyopherin α2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem KPNA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.