JWA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406231

Panoramica

ARL6IP5 codifica JWA, una proteina associata alle membrane e sensibile allo stress, implicata nella regolazione dell’organizzazione del citoscheletro, dell’adesione cellulare e del traffico vescicolare. JWA è stata collegata alla modulazione della segnalazione MAPK e delle risposte allo stress ossidativo, influenzando processi quali migrazione, proliferazione e apoptosi. Nelle cellule umane, un’alterata espressione di JWA è stata associata a una deregolazione della segnalazione infiammatoria e alla biologia dei tumori, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla progressione del cancro, sui fenotipi correlati alla metastasi e sull’adattamento cellulare allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JWA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ARL6IP5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ARL6IP5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ARL6IP5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JWA.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ARL6IP5 per lo studio della segnalazione di JWA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ARL6IP5 critici per la funzione di JWA
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ARL6IP5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal JWA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal JWA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ARL6IP5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal JWA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR JWA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ARL6IP5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ARL6IP5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.