IRE1β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424138
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IRE1β El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IRE1β, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IRE1β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424138 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ern2 codifica la enzima 1 beta dependiente de inositol (IRE1β), una quinasa/endoribonucleasa transmembrana residente del retículo endoplásmico (RE) que actúa como sensor de estrés dentro de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). Ante estrés del RE, IRE1β contribuye a la homeostasis del RE mediante la degradación regulada de ARN dependiente de IRE1 y la modulación del empalme (splicing) del ARNm de Xbp1, lo que influye en la capacidad secretora, la diferenciación epitelial y la señalización inflamatoria. En el ratón, Ern2 está enriquecido en epitelios mucosos y secretores, donde ayuda a coordinar la demanda de plegamiento proteico con programas relacionados con la barrera y las mucinas. La desregulación de las vías de estrés del RE que involucran a IRE1β es relevante para estudios sobre inflamación intestinal, defectos de la capa de moco, interacciones huésped–microbiota y fenotipos de estrés metabólico en tejidos epiteliales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IRE1β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ern2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ern2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ern2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IRE1β.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ern2 para la investigación de la señalización de IRE1β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ern2 críticos para la función de IRE1β
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ern2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IRE1β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IRE1β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ern2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IRE1β (m) y el plásmido HDR IRE1β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ern2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ern2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.