IQGAP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400597-NIC

IQGAP1 codifica IQGAP1, una proteina scaffold multidominio che integra segnali provenienti dalle GTPasi della famiglia Rho, dalla calmodulina e da regolatori del citoscheletro per coordinare la dinamica dell'actina, la polarità cellulare e il traffico di membrana. IQGAP1 collega i complessi di adesione e il citoscheletro di actina a vie di segnalazione tra cui MAPK/ERK e Wnt/β-catenina, influenzando così migrazione, proliferazione e citocinesi. Attraverso interazioni con proteine quali CDC42, RAC1, β-catenina, E-caderina e componenti dell'esocisto, IQGAP1 contribuisce a organizzare una segnalazione spazialmente ristretta al margine di avanzamento e alle giunzioni cellula–cellula. La disregolazione dell'espressione o della localizzazione di IQGAP1 è stata associata ad alterazioni dell'integrità epiteliale, comportamento invasivo e segnalazione oncogenica in molteplici contesti rilevanti per il cancro, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici dei processi legati alla metastasi.

IQGAP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IQGAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IQGAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IQGAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IQGAP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.