Integrin β3/ITGB3/CD61 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421175-NIC

マウス Itgb3 は、インテグリンβ3（ITGB3/CD61）をコードしている。これは膜貫通型の接着受容体で、αIIb または αV と対になってヘテロ二量体インテグリンを形成し、血小板凝集、細胞—マトリックス接着、ならびに outside-in／inside-out シグナル伝達の中核を担う。ITGB3 は、FAK/Src、PI3K–AKT、RhoファミリーGTPアーゼなどを含む経路を介して、フォーカルアドヒージョンの動態と細胞骨格リモデリングを制御し、遊走、生存、メカノトランスダクションを協調的に調節する。免疫系および間質の文脈では、ITGB3 を介した細胞外マトリックスリガンドとの相互作用が炎症時の細胞動員や組織リモデリングに影響し、さらに実験モデルでは、インテグリンシグナルの異常が止血機能障害や、血管・腫瘍関連微小環境における異常な表現型と関連づけられている。これらの特性により、Itgb3 はインテグリン依存的シグナル伝達ネットワーク、接着依存的な遺伝子発現制御、そして生体力学的刺激に対する状況依存的応答を研究するうえで有用な標的となる。

Integrin β3/ITGB3/CD61 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Itgb3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Itgb3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Itgb3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Itgb3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。