Importin-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403562

Panoramica

IPO7 codifica Importina-7, un recettore del trasporto nucleare della famiglia delle carioferine-β che media, in modo dipendente da RanGTP, l’importazione di un’ampia gamma di proteine cargo e di complessi ribonucleoproteici attraverso il poro nucleare. Importina-7 favorisce la localizzazione nucleare di fattori regolatori coinvolti nel controllo trascrizionale, nella biogenesi dei ribosomi e nella segnalazione dell’immunità innata, collegando il traffico nucleo‑citoplasmatico alla progressione del ciclo cellulare e alle risposte allo stress. Grazie al suo ruolo nel controllare la disponibilità nucleare di proteine di segnalazione e associate alla cromatina, IPO7 può influenzare vie che regolano la proliferazione e il mantenimento del genoma. Un trasporto nucleare deregolato è stato associato a programmi oncogenici e ad alterate interazioni ospite–patogeno, rendendo IPO7 un nodo utile per studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dal trasporto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Importin-7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IPO7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IPO7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IPO7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Importin-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IPO7 per lo studio della segnalazione di Importin-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IPO7 critici per la funzione di Importin-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IPO7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Importin-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Importin-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IPO7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Importin-7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Importin-7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IPO7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IPO7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.