Importin-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403562-ACT

IPO7 codifica l’importina-7, un recettore del trasporto nucleare della famiglia delle carioferine-β che media l’importazione RanGTP-dipendente di proteine cargo attraverso il complesso del poro nucleare. L’importina-7 favorisce la localizzazione nucleare di molteplici fattori, incluse proteine ribosomali e proteine regolatorie coinvolte nel controllo della trascrizione, nell’organizzazione della cromatina e nella progressione del ciclo cellulare, collegando così il traffico nucleo-citoplasmatico alla proteostasi e alla segnalazione della crescita. Attraverso il suo ruolo nell’importazione nucleare, IPO7 influenza la biogenesi dei ribosomi e i programmi di risposta allo stress che risultano spesso alterati negli stati proliferativi. Un trasporto nucleare disregolato e un’espressione alterata di IPO7 sono stati associati a vie oncogeniche e a fenotipi di stabilità genomica, rendendo IPO7 un nodo rilevante per studi meccanicistici del traffico nucleare nelle cellule umane.

Importin-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IPO7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Importin-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IPO7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IPO7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Importin-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IPO7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Importin-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Importin-7 nelle cellule tumorali con espressione di IPO7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.