Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-8RA: sc-401645-ACT

El CXCR1 humano codifica IL-8RA (CXCR1), un receptor acoplado a proteína G que se une a la quimiocina CXC ELR+ CXCL8/IL-8 para regular la quimiotaxis de los neutrófilos, la adhesión firme y la activación. La unión del ligando desencadena señalización dependiente de Gαi con activación aguas abajo de PLCβ/flujo de Ca²⁺, PI3K–AKT, MAPK/ERK y rutas de pequeñas GTPasas que coordinan la remodelación del citoesqueleto, la degranulación y el estallido respiratorio. El tráfico leucocitario impulsado por CXCR1 y la amplificación inflamatoria se estudian ampliamente en la inmunidad mucosal y en la inflamación asociada a tumores, y la señalización desregulada se ha implicado en trastornos inflamatorios crónicos y en la progresión del cáncer. Como receptor de quimiocinas de superficie celular, IL-8RA también se utiliza como marcador y nodo funcional en estudios de biología mieloide y de comunicación cruzada con el microambiente.

IL-8RA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CXCR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-8RA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CXCR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CXCR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-8RA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CXCR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-8RA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-8RA en células tumorales con expresión de CXCR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.