IL-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400390-ACT

O gene IL6 humano codifica a interleucina-6 (IL-6), uma citocina pleiotrópica que coordena as respostas de fase aguda, a comunicação entre as imunidades inata e adaptativa e a regulação hematopoética. A IL-6 sinaliza por meio do IL6R e do correceptor gp130 (IL6ST) para ativar as vias JAK/STAT3, MAPK/ERK e PI3K/AKT, moldando programas transcricionais ligados à inflamação, à sobrevivência e à diferenciação. A atividade desregulada de IL-6 está implicada em estados inflamatórios crônicos, autoimunidade e inflamação associada a tumores, nos quais pode influenciar a polarização mieloide, o equilíbrio entre linhagens de células T auxiliares e remodelamentos angiogênicos ou metabólicos. Como um nó central em redes de citocinas, o IL6 é frequentemente estudado por seu papel na regulação por feedback de respostas dirigidas por NF-κB e em circuitos transcricionais induzidos por estresse.

IL-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-6 em células tumorais com expressão de IL6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.