IL-4I1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420354

Übersicht

Il4i1 kodiert das durch Interleukin‑4 induzierte Gen 1 (IL‑4I1), eine sekretierte L‑Aminosäureoxidase, die von antigenpräsentierenden Zellen exprimiert wird und in entzündlichen sowie tumorähnlichen Mikroumgebungen induzierbar ist. IL‑4I1 katalysiert die oxidative Desaminierung von Aminosäuren wie Phenylalanin und erzeugt dabei Stoffwechselprodukte, darunter Wasserstoffperoxid, die das Redoxgleichgewicht und die Immun-Signalübertragung beeinflussen können. Über Aminosäurestoffwechsel und oxidativen Stress wirkt IL‑4I1 auf Programme myeloider Zellen, Aktivierungsschwellen von T‑Zellen und umfassendere immunregulatorische Schaltkreise ein. Eine fehlregulierte IL‑4I1‑Aktivität wird in der Literatur mit veränderter Immunsuppression, chronischer Entzündung und krebsassoziierter Immunflucht in Verbindung gebracht und stellt damit einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien zur Immunmetabolik in Mausmodellen dar.

Das IL-4I1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Il4i1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Il4i1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Il4i1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IL-4I1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Il4i1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IL-4I1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Il4i1-Exone abzielen, die für die IL-4I1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Il4i1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IL-4I1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IL-4I1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Il4i1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IL-4I1 HDR-Plasmid (m) und IL-4I1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Il4i1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Il4i1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.