IL-27Rα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424540

Panoramica

Il27ra codifica la catena alfa del recettore murino dell’interleuchina-27 (IL-27Rα, nota anche come WSX-1), una subunità recettoriale per citochine che si associa a gp130 per formare un complesso recettoriale dell’IL-27 funzionale. La segnalazione mediata da IL-27Rα attiva le vie JAK/STAT, in particolare STAT1 e STAT3, contribuendo a indirizzare la differenziazione delle cellule T, a modulare i programmi infiammatori associati a Th1 e Th17 e a influenzare la produzione di citochine in diversi tipi di cellule immunitarie. Attraverso questi processi, IL-27Rα contribuisce alla regolazione dell’omeostasi immunitaria, delle risposte guidate dall’antigene e dei meccanismi di controllo a feedback dell’infiammazione. Un’alterata segnalazione IL-27/IL-27Rα è stata implicata in modelli di patologia autoimmune, infiammazione cronica e disfunzione immunitaria indotta da infezioni, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca immunologica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IL-27Rα (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Il27ra in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Il27ra insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Il27ra a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IL-27Rα.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Il27ra per lo studio della segnalazione di IL-27Rα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Il27ra critici per la funzione di IL-27Rα
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Il27ra per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IL-27Rα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IL-27Rα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Il27ra. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IL-27Rα Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IL-27Rα (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Il27ra per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Il27ra definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.