IL-17RB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404114-ACT

IL17RB codifica o receptor B de interleucina-17 (IL-17RB), um receptor de citocinas transmembrana do tipo I que atua em parceria com o IL17RA para transduzir sinais de ligantes da família IL-17, principalmente a IL-25 (IL-17E). A ligação ao receptor recruta proteínas adaptadoras como a ACT1 para estimular vias de sinalização de NF-κB e MAPK, conectando a detecção epitelial e estromal à produção de quimiocinas, à inflamação mucosa e à polarização imune do tipo 2. A atividade do IL-17RB influencia o “crosstalk” entre tecidos das vias aéreas e de barreira, células mieloides e subpopulações linfoides, moldando respostas a alérgenos e helmintos, bem como processos mais amplos de remodelamento inflamatório. A desregulação da expressão ou da sinalização de IL17RB tem sido associada a estados inflamatórios crônicos e a alterações no microambiente imune associado a tumores, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de sinalização imune e comunicação célula–célula.

IL-17RB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL17RB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-17RB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL17RB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL17RB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-17RB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL17RB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-17RB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-17RB em células tumorais com expressão de IL17RB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.