IKKβ Plasmide Double Nickase (m): sc-421074-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IKKβ Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IKKβ Double Nickase Plasmid (m) e il IKKβ Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ikbkb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IKKβ Plasmide Double Nickase (m) | sc-421074-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IKKβ Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421074-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ikbkb codifica la subunità catalitica IKKβ (IKKβ), un componente centrale del complesso IKK che fosforila le proteine IκB promuovendone l’ubiquitinazione e la degradazione, consentendo la traslocazione nucleare di NF-κB e l’attivazione di risposte trascrizionali. Attraverso la segnalazione canonica di NF-κB, IKKβ integra segnali provenienti da recettori di citochine come TNFR e IL-1R, da recettori di riconoscimento dei pattern e da vie di stress cellulare, regolando infiammazione, immunità innata e programmi di sopravvivenza. Un’attività di IKKβ deregolata è ampiamente utilizzata come punto di accesso molecolare per studiare la segnalazione infiammatoria cronica, gli stati di attivazione delle cellule immunitarie e le reti trascrizionali adattative allo stress in modelli murini. La perturbazione di Ikbkb è inoltre rilevante per studi meccanicistici su infiammazione oncogena, disfunzione metabolica e processi neuroinfiammatori, in cui il “tono” della via di NF-κB modella i fenotipi cellulari.
IKKβ Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ikbkb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ikbkb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ikbkb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ikbkb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.