Particules Lentivirales d'Activation (h) IK1: sc-402139-LAC

KCNN4 code le canal potassique IK1 (KCa3.1) activé par le Ca2+ et de conductance intermédiaire, une protéine membranaire qui couple les signaux calciques intracellulaires à l’efflux de K+ et à l’hyperpolarisation de la membrane. En modulant le potentiel de membrane et l’entrée de calcium, IK1 influence des processus tels que la régulation du volume cellulaire, le transport épithélial des électrolytes et la signalisation dépendante de l’activation dans les cellules immunitaires. L’activité de KCNN4/IK1 s’inscrit à l’intersection de voies dépendantes du Ca2+ qui modulent la prolifération, la migration et les réponses cytokiniques, ce qui la rend pertinente pour l’étude de l’inflammation et du remodelage tissulaire. Une altération de la fonction d’IK1 a été associée à des changements pathologiques dans la biologie vasculaire, des voies aériennes et du système immunitaire, ce qui appuie son utilisation comme cible mécanistique dans des modèles de maladie.

Les particules d'activation lentivirales IK1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de KCNN4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IK1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription KCNN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IK1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif KCNN4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.