IGSF6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411445-ACT

IGSF6 (membro 6 da superfamília das imunoglobulinas) é uma proteína transmembrana do tipo imunoglobulina, enriquecida em células da linhagem mieloide, onde contribui para a regulação da sinalização imune inata e dos estados de ativação celular. Ela tem sido associada a processos inflamatórios por meio de efeitos nas respostas de macrófagos e monócitos e é estudada no contexto de vias induzidas por citocinas e de defesa do hospedeiro. Foi relatada expressão alterada de IGSF6 em doenças imunomediadas, o que sustenta seu uso como marcador e como nó mecanístico em programas transcricionais associados à inflamação. Pesquisas frequentemente investigam o IGSF6 em vias que governam a ativação de leucócitos, o processamento/apresentação de antígenos e o remodelamento inflamatório de tecidos.

IGSF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IGSF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IGSF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IGSF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IGSF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IGSF6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IGSF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IGSF6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IGSF6 em células tumorais com expressão de IGSF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.