IGFBP3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400682-LAC

IGFBP3 (proteina legante il fattore di crescita insulino-simile 3) è una proteina regolatoria secreta che si lega con alta affinità a IGF-I e IGF-II per modulare la biodisponibilità degli IGF, l’interazione con i recettori e la segnalazione a valle delle vie PI3K–AKT e MAPK. Oltre al sequestro degli IGF, IGFBP3 partecipa al controllo del ciclo cellulare, all’apoptosi, alla senescenza e alle risposte allo stress attraverso interazioni dipendenti dal contesto con componenti della matrice extracellulare e con partner di superficie cellulare o nucleari. La sua espressione è regolata dinamicamente da segnali ormonali e infiammatori ed è spesso alterata in contesti di biologia tumorale, disregolazione metabolica e rimodellamento tissutale. Queste proprietà rendono IGFBP3 un nodo utile per analizzare la segnalazione dei fattori di crescita, il controllo della proliferazione e fenotipi dipendenti dal microambiente nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IGFBP3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IGFBP3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IGFBP3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IGFBP3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IGFBP3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IGFBP3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.