IGFBP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421064
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IGFBP3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IGFBP3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IGFBP3 Antibody (B-5): sc-365936
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IGFBP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421064 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Igfbp3 codifica la proteina 3 legante i fattori di crescita insulino-simili (IGFBP3), un regolatore secreto che si lega a IGF-I e IGF-II per modularne la biodisponibilità, l’interazione con i recettori e la segnalazione a valle attraverso l’asse IGF. Modellando l’attività delle vie PI3K–AKT e MAPK/ERK guidate dagli IGF, IGFBP3 influenza la crescita cellulare, la sopravvivenza, la differenziazione e il rimodellamento tissutale in molteplici organi del topo. IGFBP3 può inoltre esercitare effetti IGF-dipendenti e IGF-indipendenti sull’apoptosi e sulle risposte allo stress tramite interazioni con componenti della matrice extracellulare e partner sulla superficie cellulare. L’espressione deregolata di Igfbp3 o lo squilibrio tra IGF e IGFBP è spesso oggetto di studio in contesti di controllo anomalo della crescita, regolazione metabolica, infiammazione e reti di segnalazione oncogeniche.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IGFBP3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Igfbp3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Igfbp3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Igfbp3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IGFBP3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Igfbp3 per lo studio della segnalazione di IGFBP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Igfbp3 critici per la funzione di IGFBP3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Igfbp3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IGFBP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IGFBP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Igfbp3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IGFBP3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IGFBP3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Igfbp3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Igfbp3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.