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IFT20慢病毒激活颗粒(h) | sc-418576-LAC | 200 µl | $455.00 |
IFT20(鞭毛内运输蛋白20)是鞭毛内运输(IFT)机器的核心组成部分,对初级纤毛的组装与维持必不可少,从而支持依赖纤毛的信号传导以及极性运输。除在纤毛中的作用外,IFT20还定位于高尔基体,参与囊泡分选并将膜蛋白递送至纤毛和免疫突触,使其与受体组织与信号转导相关联。通过这些功能,IFT20会影响刺猬(Hedgehog)信号通路以及其他由纤毛介导的发育与稳态过程。纤毛运输失调和IFT复合体功能异常通常与纤毛病相关表型广泛相关,同时也与细胞周期调控、分化及组织形态发生等研究领域密切相关。
IFT20 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 IFT20 表达。
IFT20 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在IFT20转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性IFT20表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 IFT20 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。