IFN-α/βRβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421048

Descripción general

Ifnar2 codifica la subunidad del receptor murino de interferón-α/β IFN-α/βRβ (IFNAR2), un componente central del complejo receptor de interferón de tipo I que conecta la unión extracelular de IFN-α/β con la señalización intracelular JAK–STAT. Tras la activación del receptor, IFNAR2 coopera con IFNAR1 para activar TYK2 y JAK1, promoviendo la fosforilación de STAT1/STAT2 y la formación de ISGF3 para inducir genes estimulados por interferón que regulan la defensa antiviral, la presentación de antígenos y la programación de células inmunitarias innatas. Esta vía define puntos de ajuste inflamatorios y el diálogo con las rutas de señalización de NF-κB y MAPK, influyendo en redes de citocinas y en la homeostasis inmunitaria. La desregulación de la señalización dependiente de IFNAR2 se ha implicado en patología mediada por el sistema inmunitario y en una susceptibilidad alterada a la infección y la inflamación, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos en inmunología y biología del huésped–patógeno.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IFN-α/βRβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ifnar2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ifnar2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ifnar2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IFN-α/βRβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ifnar2 para la investigación de la señalización de IFN-α/βRβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ifnar2 críticos para la función de IFN-α/βRβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ifnar2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IFN-α/βRβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ifnar2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IFN-α/βRβ (m) y el plásmido HDR IFN-α/βRβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ifnar2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ifnar2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.