IFN-α/βRα Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401662-ACT

IFNAR1 codifica la subunità alfa del recettore per gli interferoni α/β (IFN-α/βRα), un componente essenziale di membrana del complesso recettoriale degli interferoni di tipo I che lega IFN-α e IFN-β per avviare segnali antivirali e immunomodulatori. Il legame del ligando attiva JAK1/TYK2 e, a valle, i programmi trascrizionali STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3), inducendo geni stimolati dall’interferone che plasmano l’immunità innata, la presentazione dell’antigene e il tono infiammatorio. Le vie dipendenti da IFNAR1 interagiscono con la segnalazione NF-κB e MAPK e influenzano la sopravvivenza cellulare, la differenziazione e le reti citochiniche nei compartimenti immunitari e stromali. Una segnalazione IFNAR1 disregolata è implicata in risposte antivirali alterate e in fenotipi immunitari guidati dall’interferone, rilevanti per la biologia delle infezioni, per firme associate all’autoimmunità e per le interazioni tumore–sistema immunitario.

IFN-α/βRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNAR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-α/βRα Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNAR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNAR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-α/βRα. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNAR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-α/βRα nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-α/βRα nelle cellule tumorali con espressione di IFNAR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.