IFIT2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403830-ACT

La proteina indotta dall’interferone con ripetizioni tetratricopeptidiche 2 (IFIT2) è il prodotto di un gene stimolato dall’interferone che si lega a RNA virali e cellulari e modula la traduzione e la segnalazione dell’immunità innata. IFIT2 partecipa ai programmi antivirali mediati dall’interferone di tipo I e dalla via JAK–STAT, influenzando il metabolismo dell’RNA, le risposte allo stress e le vie apoptotiche durante la stimolazione infiammatoria. Un’espressione disregolata di IFIT2 è stata osservata in diversi contesti associati a infezione e infiammazione ed è stata collegata ad alterazioni delle firme interferoniche riportate nella biologia delle malattie autoimmuni e nei microambienti tumorali. In quanto nodo nelle reti regolate dall’interferone, IFIT2 è spesso utilizzato come readout dell’attivazione dell’immunità innata e come strumento meccanicistico per studiare le interazioni ospite–patogeno e gli stati trascrizionali guidati dalle citochine.

IFIT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFIT2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFIT2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFIT2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFIT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFIT2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFIT2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFIT2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFIT2 nelle cellule tumorali con espressione di IFIT2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.