HYAL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405005-ACT

O HYAL2 humano codifica uma hialuronidase ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que participa da remodelação da matriz extracelular ao iniciar a despolimerização do hialuronano (HA) na superfície celular. Ao gerar fragmentos intermediários de HA que podem ser posteriormente processados por outras hialuronidases, o HYAL2 influencia a organização da matriz pericelular, a adesão e a motilidade celular, e pode modular a sinalização mediada por receptores ligada à biologia do HA, como as vias associadas a CD44 e RHAMM. Alterações no turnover de HA e na atividade do HYAL2 têm sido associadas a mudanças na inflamação e na fibrose tecidual, bem como a fenótipos do microambiente tumoral, incluindo invasão e remodelação do estroma. Como resultado, o HYAL2 é frequentemente estudado em contextos em que a dinâmica da matriz molda o comportamento celular, incluindo processos de desenvolvimento, respostas a feridas e regulação da matriz extracelular associada ao câncer.

HYAL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HYAL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HYAL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HYAL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HYAL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HYAL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HYAL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HYAL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HYAL2 em células tumorais com expressão de HYAL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.