Plásmido CRISPR de Activación (h) HYAL2: sc-405005-ACT

HYAL2 humana codifica una hialuronidasa anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI) que participa en la remodelación de la matriz extracelular al iniciar la despolimerización del hialuronano (HA) en la superficie celular. Al generar fragmentos intermedios de HA que pueden ser procesados posteriormente por otras hialuronidasas, HYAL2 influye en la organización de la matriz pericelular, la adhesión y la motilidad celulares, y puede modular la señalización mediada por receptores vinculada a la biología del HA, como las vías asociadas a CD44 y RHAMM. La alteración del recambio de HA y de la actividad de HYAL2 se ha asociado con cambios en la inflamación y la fibrosis tisular, así como con fenotipos del microambiente tumoral que incluyen la invasión y la remodelación del estroma. En consecuencia, HYAL2 se estudia con frecuencia en contextos en los que la dinámica de la matriz determina el comportamiento celular, incluidos procesos del desarrollo, respuestas a heridas y la regulación de la matriz extracelular asociada al cáncer.

HYAL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HYAL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HYAL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HYAL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HYAL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HYAL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HYAL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HYAL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HYAL2 en células tumorales con expresión de HYAL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.