HuC Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400172-ACT

ELAVL3 (HuC) è una proteina legante l’RNA arricchita nei neuroni che riconosce elementi ricchi in AU nei trascritti bersaglio per regolare la stabilità dell’mRNA, lo splicing e la traduzione, sostenendo la differenziazione e il mantenimento neuronali. Modellando programmi di espressione genica post-trascrizionali, HuC contribuisce alla neurogenesi, alla crescita dei neuriti e alla funzione sinaptica attraverso un controllo coordinato del metabolismo dell’RNA. Un’espressione o una localizzazione deregolate di ELAVL3 possono perturbare l’omeostasi neuronale e sono state studiate in contesti legati alla biologia delle malattie del neurosviluppo e neurodegenerative. In quanto marcatore dei neuroni post-mitotici, HuC è spesso utilizzato per studiare l’impegno di linea e i cambiamenti di stato neuronale in modelli cellulari umani.

HuC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ELAVL3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HuC Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ELAVL3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ELAVL3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HuC. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ELAVL3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HuC nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HuC nelle cellule tumorali con espressione di ELAVL3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.