Particules Lentivirales d'Activation (h) HSPA8/HSC70: sc-418508-LAC

HSPA8 (HSC70) code une chaperonne de la famille HSP70 exprimée de façon constitutive, qui soutient la protéostasie en régulant le repliement et le repliement correctifs des protéines dépendants de l’ATP, ainsi que la prévention de leur agrégation. HSC70 coordonne l’autophagie médiée par les chaperonnes via le ciblage lysosomal de substrats portant le motif KFERQ, participe à l’endocytose médiée par la clathrine et aide à la maturation et au trafic de protéines de signalisation. Par ses interactions avec des co‑chaperonnes et le système ubiquitine–protéasome, elle influence les réponses au stress, la dynamique du cytosquelette et le contrôle qualité des organites. Une dérégulation des réseaux de chaperonnes liés à HSPA8 a été associée à la neurodégénérescence, aux programmes de survie des cellules cancéreuses et aux interactions hôte–pathogène, ce qui en fait un nœud utile pour des études fonctionnelles axées sur les voies.

Les particules d'activation lentivirales HSPA8/HSC70 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HSPA8 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HSPA8/HSC70 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HSPA8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HSPA8/HSC70. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HSPA8 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.