Plasmide CRISPR d'Activation (h) HSP 56: sc-403455-ACT

FKBP4 code l’immunophiline FKBP52 (HSP56), une isomérase peptidyl‑prolyl cis‑trans et co‑chaperon de HSP90 qui régule le repliement, la maturation et le trafic des protéines clientes. HSP56 agit au sein de complexes chaperons multiprotéiques qui modulent la signalisation des récepteurs des hormones stéroïdiennes, notamment les voies des récepteurs aux glucocorticoïdes, aux androgènes et à la progestérone, en influençant la stabilité des récepteurs, leur translocation nucléaire et leur activité transcriptionnelle. Grâce à ses interactions médiées par les domaines TPR avec HSP90 et d’autres co‑chaperons, FKBP4 fait le lien entre la protéostasie dépendante du stress et des programmes de transduction du signal qui façonnent la croissance et la différenciation cellulaires. Des réseaux chaperon/co‑chaperon dérégulés impliquant FKBP4 ont été associés à des altérations de la signalisation endocrinienne et de l’homéostasie protéique, avec des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer et la recherche sur la neurodégénérescence.

HSP 56 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FKBP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HSP 56 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FKBP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FKBP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HSP 56. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FKBP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HSP 56 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HSP 56 dans les cellules tumorales présentant une expression de FKBP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.