HS2ST1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405010-ACT

HS2ST1 codifica a heparan sulfato 2-O-sulfotransferase 1, uma enzima residente no complexo de Golgi que catalisa a 2-O-sulfatação de resíduos de ácido idurônico durante a biossíntese de proteoglicanos de heparan sulfato. Essa modificação ajuda a definir a estrutura fina do heparan sulfato e regula a ligação de ligantes a fatores de crescimento, morfógenos e quimiocinas, influenciando a sinalização por vias como FGF, VEGF, WNT e Hedgehog. Ao moldar as interações com a matriz extracelular e o engajamento de receptores, HS2ST1 contribui para a proliferação celular, a migração e o padrão de desenvolvimento. Padrões desregulados de sulfatação do heparan sulfato têm sido associados a alterações na sinalização do microambiente tumoral, na angiogênese e em respostas inflamatórias, tornando o HS2ST1 um alvo relevante para estudos mecanísticos de sinalização dependente de glicosaminoglicanos.

HS2ST1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HS2ST1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HS2ST1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HS2ST1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HS2ST1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HS2ST1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HS2ST1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HS2ST1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HS2ST1 em células tumorais com expressão de HS2ST1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.