Hrs Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401501-ACT

O gene humano **HGS** codifica o substrato de tirosina-quinase regulado pelo fator de crescimento de hepatócitos (**Hrs**), um adaptador de triagem endossomal que coordena o tráfego dependente de ubiquitina de receptores ativados. O Hrs atua no complexo **ESCRT-0** para reconhecer cargas ubiquitinadas e promover sua triagem para vesículas intraluminais de corpos multivesiculares, moldando assim a degradação lisossomal e a atenuação do sinal dos receptores. Ao controlar a endocitose, a maturação endossomal e o turnover de proteínas de membrana, o Hrs influencia vias ligadas à sinalização de fatores de crescimento, à dinâmica de receptores de citocinas e à homeostase celular. Alterações na triagem endossomal e disfunções do ESCRT têm sido associadas à persistência de sinalização oncogênica e a fenótipos neurodegenerativos, tornando o HGS/Hrs um nó útil para estudos mecanísticos da biologia de doenças dependente de tráfego.

Hrs O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HGS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hrs O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HGS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HGS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hrs. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HGS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hrs no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hrs em células tumorais com expressão de HGS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.