HRF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402606-ACT

A TPT1 humana codifica o fator liberador de histamina (HRF), uma proteína multifuncional conservada, implicada no crescimento celular, na sobrevivência e na adaptação ao estresse. O HRF participa de processos ligados ao controle da tradução, à dinâmica dos microtúbulos e à regulação da apoptose, e pode influenciar a sinalização imune e as respostas inflamatórias por meio de vias associadas à histamina. A expressão desregulada de TPT1/HRF tem sido relatada em múltiplos contextos de doença, incluindo biologia do câncer, inflamação alérgica e outras condições imunomediadas, nas quais pode modular a proliferação, redes de citocinas e a resiliência celular. Essas características fazem de TPT1 um alvo útil para dissecar vias que conectam a proteostase e as respostas ao estresse a fenótipos associados à imunidade e a tumores.

HRF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TPT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HRF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TPT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TPT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HRF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TPT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HRF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HRF em células tumorais com expressão de TPT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.