HRC Plasmide Double Nickase (m): sc-420947-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HRC Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HRC Double Nickase Plasmid (m) e il HRC Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Hrc. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HRC Plasmide Double Nickase (m) | sc-420947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HRC Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Hrc** codifica la **proteina legante il calcio ricca di istidina (HRC)**, un componente luminale del reticolo sarcoplasmatico che modula le dinamiche di immagazzinamento e rilascio del calcio nel muscolo striato. HRC interagisce con elementi chiave dell’apparato di accoppiamento eccitazione–contrazione, inclusi la ricaptazione di Ca2+ mediata da SERCA e il rilascio di Ca2+ dipendente dal recettore della rianodina, contribuendo così a modellare i transitori citosolici di Ca2+ e la segnalazione a valle. Attraverso il suo ruolo nell’omeostasi del calcio, HRC è collegata a vie che regolano la contrattilità dei miociti, le risposte allo stress e programmi trascrizionali Ca2+-dipendenti. Una funzione dis-regolata di HRC è stata associata ad alterazioni della fisiologia del muscolo cardiaco e scheletrico ed è comunemente studiata nel contesto dell’aritmogènesi e di fenotipi cellulari rilevanti per la cardiomiopatia.
HRC Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Hrc nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Hrc. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Hrc. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Hrc interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.