hnRNP H3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404805-ACT

HNRNPH3 codifica a ribonucleoproteína nuclear heterogênea humana H3 (hnRNP H3), uma proteína ligante de RNA que se associa a transcritos nascentes e regula o processamento do pré-mRNA. A hnRNP H3 contribui para a seleção de sítios de splicing e para programas de splicing alternativo por meio do reconhecimento de elementos de RNA ricos em guanina (G), influenciando o equilíbrio de isoformas de transcritos, a maturação de RNA e redes de expressão gênica a jusante. Como parte de complexos ribonucleoproteicos ligados ao processamento de RNA co-transcricional, ela interage com vias que governam a exportação de mRNA, a estabilidade e a competência para tradução. A desregulação de fatores de splicing da família hnRNP é frequentemente estudada no contexto do uso aberrante de isoformas observado em diferentes cânceres e em modelos de doenças neurológicas, tornando o HNRNPH3 relevante para investigar fenótipos impulsionados pelo processamento de RNA.

hnRNP H3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HNRNPH3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hnRNP H3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HNRNPH3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HNRNPH3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hnRNP H3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HNRNPH3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hnRNP H3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hnRNP H3 em células tumorais com expressão de HNRNPH3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.