hnRNP F Plasmide Double Nickase (h): sc-401892-NIC

HNRNPF codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea F (hnRNP F), una proteina legante l’RNA che riconosce motivi ricchi in G per regolare lo splicing alternativo del pre‑mRNA, la formazione dell’estremità 3′ e la stabilità dell’mRNA. hnRNP F opera all’interno delle reti di processamento dell’RNA spliceosomiale e co‑trascrizionale, influenzando la scelta delle isoforme trascrittomiche e i programmi di regolazione genica post‑trascrizionale. Modellando il metabolismo dell’RNA, HNRNPF incide su vie legate al controllo del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e al rimodellamento dei trascritti dipendente dai segnali. Un’attività deregolata di hnRNP F e pattern di splicing alterati sono stati riportati in contesti di malattie umane, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sui difetti di processamento dell’RNA e sulla deregolazione dell’espressione genica.

hnRNP F Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HNRNPF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HNRNPF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HNRNPF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HNRNPF interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.