hnRNP A0 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406924-LAC

HNRNPA0 codifica hnRNP A0, una proteina legante l’RNA che si associa a complessi mRNP per regolare l’espressione genica post-trascrizionale, inclusi la stabilità dell’mRNA, il suo turnover e la traduzione di trascritti selezionati. Attraverso queste funzioni contribuisce alle risposte cellulari allo stress e al rimodellamento dinamico dei programmi di espressione genica che influenzano il controllo del ciclo cellulare e la segnalazione infiammatoria. hnRNP A0 è stata studiata nel contesto di reti di segnalazione guidate da chinasi e di vie del metabolismo dell’RNA che determinano il destino dei trascritti in condizioni di stress. La disregolazione delle proteine della famiglia hnRNP e dei meccanismi associati di processamento dell’RNA è frequentemente collegata ad alterazioni dei fenotipi proliferativi e di adattamento allo stress, rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi che coinvolgono un’espressione genica aberrante.

Le particelle di attivazione lentivirale hnRNP A0 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HNRNPA0 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale hnRNP A0 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPA0, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di hnRNP A0. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HNRNPA0 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.