HNF-6 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401082-LAC

ONECUT1 codifica il fattore nucleare epatocitario 6 (HNF-6), un fattore di trascrizione sequenza-specifico che coordina programmi di regolazione genica responsabili della differenziazione epiteliale e dell’organogenesi, in particolare nelle linee cellulari di fegato e pancreas. HNF-6 integra reti trascrizionali dello sviluppo per controllare l’attività di promotori ed enhancer coinvolti nella specificazione epatobiliare, nell’espressione di geni del metabolismo di glucosio e lipidi e nel mantenimento dell’identità epiteliale. Un’attività deregolata di ONECUT1/HNF-6 è stata associata ad alterazioni dello sviluppo endocrino pancreatico e a disfunzioni epatobiliari, rendendolo rilevante per lo studio del controllo trascrizionale delle vie metaboliche e dell’impegno di linea. Nei modelli cellulari umani, la modulazione di HNF-6 consente di investigare circuiti di regolazione genica, trascrizione dipendente dalla cromatina e stati trascrizionali associati a malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale HNF-6 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ONECUT1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HNF-6 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ONECUT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HNF-6. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ONECUT1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.