HNF-6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420893

Panoramica

Onecut1 codifica il fattore di trascrizione homeobox HNF-6, un regolatore chiave della differenziazione dei tessuti di origine endodermica nel topo, incluse le linee pancreatiche, epatiche e biliari. HNF-6 si lega a elementi cis-regolatori per coordinare programmi trascrizionali che controllano la morfogenesi epiteliale, lo sviluppo dei dotti e le decisioni di destino cellulare, e interagisce funzionalmente con le vie di segnalazione Notch, Wnt/β-catenina e TGF-β durante l’organogenesi e l’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’attività di Onecut1 sono state associate a difetti nello sviluppo endocrino del pancreas e nel patterning duttale, rendendolo rilevante per studi su disfunzioni metaboliche e fenotipi dello sviluppo. Nei sistemi sperimentali, la perturbazione di Onecut1/HNF-6 viene utilizzata per analizzare le reti trascrizionali che collegano lo stato della cromatina alla specificazione di linea e alla maturazione d’organo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HNF-6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Onecut1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Onecut1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Onecut1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HNF-6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Onecut1 per lo studio della segnalazione di HNF-6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Onecut1 critici per la funzione di HNF-6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Onecut1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HNF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HNF-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Onecut1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HNF-6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HNF-6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Onecut1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Onecut1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.