HNF-3β Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420890-LAC

Foxa2 codifica il fattore nucleare degli epatociti 3 beta (HNF-3β), un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box che agisce come “pioneer factor” aprendo la cromatina e coordinando programmi genici specifici di linea durante la formazione dell’endoderma. Durante lo sviluppo del topo e nei tessuti adulti, HNF-3β regola reti trascrizionali che controllano la differenziazione epatica e pancreatica, il metabolismo degli acidi biliari e del glucosio e l’omeostasi epiteliale, attraverso interazioni con la segnalazione dei recettori nucleari e con altri regolatori della trascrizione. L’attività di Foxa2 integra segnali di patterning dello sviluppo e vie metaboliche, influenzando le decisioni sull’identità cellulare e le risposte allo stress. La disregolazione dei programmi associati a Foxa2 è stata collegata ad alterazioni della regolazione metabolica e a fenotipi di rimodellamento tissutale rilevanti per modelli di diabete e di malattie del fegato.

Le particelle di attivazione lentivirale HNF-3β (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Foxa2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale HNF-3β (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Foxa2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di HNF-3β. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Foxa2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.