HIV Tat-SF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404479

Panoramica

HTATSF1 codifica il fattore 1 specifico per Tat di HIV (HIV Tat-SF1), una proteina nucleare legante l’RNA che agisce come cofattore trascrizionale e regolatore del processamento del pre‑mRNA. HIV Tat-SF1 è stato collegato al coordinamento tra la trascrizione mediata dall’RNA polimerasi II e l’attività dello spliceosoma, influenzando lo splicing alternativo e la maturazione dell’mRNA in diversi programmi genici. Attraverso questi ruoli nel processamento co-trascrizionale dell’RNA, HTATSF1 contribuisce all’omeostasi cellulare ed è stato studiato nel contesto delle interazioni ospite–virus che dipendono da un controllo preciso della trascrizione e del metabolismo dell’RNA. La disregolazione dei fattori di splicing accoppiati alla trascrizione è ampiamente rilevante per cambiamenti dell’espressione genica associati a patologie e per fenotipi di processamento dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HIV Tat-SF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HTATSF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HTATSF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HTATSF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HIV Tat-SF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HTATSF1 per lo studio della segnalazione di HIV Tat-SF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HTATSF1 critici per la funzione di HIV Tat-SF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HTATSF1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HIV Tat-SF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HIV Tat-SF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HTATSF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HIV Tat-SF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HIV Tat-SF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HTATSF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HTATSF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.