HERG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401143

Descripción general

KCNH2 codifica el canal humano de potasio dependiente de voltaje HERG (Kv11.1), un mediador clave de la corriente rectificadora retardada rápida (IKr) que modela la repolarización de la fase 3 del potencial de acción cardíaco. La actividad de HERG se integra con redes más amplias de canales iónicos y programas de excitabilidad de membrana para controlar la duración del potencial de acción, la refractariedad y la ritmicidad. La alteración de la función de KCNH2 se asocia fuertemente con fenotipos arrítmicos hereditarios y adquiridos, incluido el síndrome de QT largo, y constituye un nodo central en la investigación de electrofisiología y farmacología de seguridad. Más allá de los cardiomiocitos, la expresión de KCNH2 se ha estudiado en contextos excitables y no excitables donde la conductancia de potasio influye en la proliferación y en los estados de señalización celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HERG (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KCNH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KCNH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KCNH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HERG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KCNH2 para la investigación de la señalización de HERG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KCNH2 críticos para la función de HERG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KCNH2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HERG CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HERG CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KCNH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HERG (h) y el plásmido HDR HERG (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KCNH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KCNH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.