Hemoglobin ε Plasmide Double Nickase (h): sc-403392-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Hemoglobin ε Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Hemoglobin ε Double Nickase Plasmid (h) e il Hemoglobin ε Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HBE1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Hemoglobin ε Plasmide Double Nickase (h) | sc-403392-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hemoglobin ε Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403392-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HBE1 codifica per l’emoglobina ε, una catena globinica embrionale che forma tetrameri di emoglobina funzionali insieme a globine di tipo α, supportando il trasporto di ossigeno nelle fasi iniziali dello sviluppo umano. La sua espressione è regolata in modo stringente all’interno della regione di controllo del locus β-globinico e del programma di switching dell’emoglobina durante lo sviluppo, collegando HBE1 alla differenziazione eritroide e alle vie di gestione dell’eme e del ferro. Un’alterata regolazione del cluster delle globine è rilevante nelle emoglobinopatie e nello stress eritropoietico, in cui i pattern di espressione delle globine dello sviluppo possono modulare l’equilibrio tra le catene globiniche. Come marcatore dei programmi eritroidi precoci, l’emoglobina ε è spesso utilizzata per studiare l’impegno di linea e il controllo trascrizionale lungo il cluster genico della β-globina.
Hemoglobin ε Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HBE1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HBE1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HBE1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HBE1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.